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试剂名称规格保存条件取液液体30mL×1瓶4℃保存剂一液体8mL×1瓶4℃保存剂二粉剂×1瓶4℃保存剂三液体20mL×1瓶4℃保存准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制,
3、标准品,10mg半乳糖醛酸。临用前加入0.943mL蒸馏水,配成50μmol/mL的标准液。
多聚半乳糖醛酸酶,Ploygalacturonase(PG)属果胶酶的一种,广泛存在于植物、细菌及真菌中。其催化多聚半乳糖醛酸分解,在果实软化、花粉授粉、种子发育成熟及器官脱落等方面具有重要作用,并且病原菌在侵染宿主植物时,可分泌多聚半乳糖醛酸酶来降解宿主细胞壁,进而导致病程发展。
PG水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸,半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质,测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
注意,实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
可见分光光度计、低温台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
组织,按照质量(g),提取液体积(mL)为1:5~10的比例,建议称取约0.1g,加入1mL提取液,加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,16000g,离心10min,取上清置于冰上待测。
细菌,先收集细菌到离心管内,离心后弃上清,按照细菌数量,104个,,提取液体积(mL)为500~1000,1的比例,建议500万个细菌加入1mL提取液,,冰浴超声波破碎细菌,功率20%或200W,超声3s,间隔7s,总时间5min,,然后4℃,16000g,离心10min取上清置于冰上待测。
本产品仅供科学研究使用,请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途,-上海液质检测技术有限公司
2、将50μmol/mL标准液用蒸馏水稀释为10、6、4、3、2、1.5、1.2μmol/mL的标准溶液备用。
试剂名称(μL)测定管对照管空白管标准管本5050--馏水--50-准溶液--50剂一0剂二℃水浴准确反应2h后,沸水浴加热10min,盖紧,防止水分散失,,出后冷却至室温。-剂二-100--剂三0水浴加热5min,盖紧,防止水分散失,,取出后冷却至室温。馏水0定540nm处的吸光度,记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管,计算ΔA=A测定管-A照管,ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管。
以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA带入方程得到x,µmol/mL,
酶活定义,在40℃,pH6.0的条件下,每毫克蛋白每小时分解多聚半乳糖醛酸产生1μmol的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。
酶活定义,在40℃,pH6.0的条件下,每克样本每小时分解多聚半乳糖醛酸产生1μmol的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。
酶活定义,在40℃,pH6.0的条件下,每104个细菌每小时分解多聚半乳糖醛酸产生1μmol的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。
酶活定义,在40℃,pH6.0的条件下,每mL样本每小时分解多聚半乳糖醛酸产生1μmol的半乳糖醛酸定义为一个酶活力单位。
本产品仅供科学研究使用,请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途,-上海液质检测技术有限公司
1、样本提取上清液置于冰上待测,且样本提取完成后建议当天提取当天内测完。
2、当A大于1.2时,建议将样本用提取液稀释后再进行测定,并在计算公式中乘以相应稀释倍数。
4、若样本ΔA值偏小,建议延长酶促反应时间,并在计算公式中除以相应时间。
本产品仅供科学研究使用,请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途,-上海液质检测技术有限公司